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Ensayo MTT para medir la viabilidad celular

1983
  • Tim Mosmann
Científico que realiza el ensayo MTT en un laboratorio de biología celular para evaluar la viabilidad celular.

(Imagen generada únicamente con fines ilustrativos)

The MTT assay is a colorimetric method for assessing cell metabolic activity, which serves as a apoderado for cell viability, proliferation, and citotoxicidad. Viable cells with active mitochondria contain reductase enzymes that convert the yellow tetrazolium salt MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) into an insoluble purple formazan. The amount of formazan produced is proportional to the number of living cells.

El ensayo MTT, descrito por primera vez por Tim Mosmann en 1983, revolucionó la forma en que los investigadores cuantifican las respuestas celulares in vitro. Proporcionó una alternativa más rápida, cuantitativa y menos radiactiva a métodos anteriores, como el ensayo de liberación de cromo. El principio se basa en la actividad de las deshidrogenasas mitocondriales en células vivas. Estas enzimas forman parte de la cadena de transporte de electrones y solo están activas en células con función metabólica.

In the procedure, the water-soluble yellow MTT reagent is added to cells in a culture plate. It is taken up by the cells and reduced by mitochondrial enzymes into formazan, which is an insoluble, purple, crystalline product. The formazan crystals accumulate within the cells. After an incubation period, a solubilizing agent, such as dimethyl sulfoxide (DMSO) or an acidified alcohol solution, is added to dissolve these crystals, resulting in a colored solution. The absorbance of this purple solution is then measured using a spectrophotometer at a specific wavelength (typically between 500 and 600 nm). The intensity of the color is directly proportional to the number of metabolically active, and therefore viable, cells. By comparing the absorbance of treated cells to untreated control cells, one can calculate the percentage of citotoxicidad or inhibition of proliferation caused by the test compound.

UNESCO Nomenclature: 2406
- Biología celular

Tipo

Procedimiento médico

Ruptura

Sustancial

Uso

Uso generalizado

Precursores

  • desarrollo de técnicas de cultivo celular
  • Comprensión de la respiración mitocondrial y la cadena de transporte de electrones
  • invención del espectrofotómetro
  • Uso de sales de tetrazolio como indicadores redox en histología
  • Necesidad de un ensayo de viabilidad celular cuantitativo y no radiactivo

Aplicaciones

  • Detección de fármacos con efectos citotóxicos en la investigación del cáncer
  • pruebas toxicológicas de productos químicos
  • evaluación de la proliferación celular en respuesta a factores de crecimiento
  • cribado de alto rendimiento en el descubrimiento de fármacos
  • biocompatibilidad testing of materials

Patentes:

NA

Ideas para posibles innovaciones

  • Sistemas robóticos automatizados para el cribado de MTT de ultra alto rendimiento
  • Desarrollo de ensayos de formazán similares, pero solubles en agua (mts, xxt, wst-1) para simplificar el protocolo
  • Multiplexación de ensayos de mtt con otros ensayos (por ejemplo, para apoptosis) en el mismo pocillo
  • Adaptación del ensayo mtt para cultivos celulares 3D y organoides
  • microfluidos devices incorporating mtt-based viability checks
  • Uso de ensayos MTT para detectar compuestos que mejoran la función mitocondrial
  • Desarrollo de kits basados ​​en mtt para pruebas de toxicidad del agua en el hogar
  • Integración de lecturas MTT en plataformas de descubrimiento de fármacos basadas en IA
  • Utilizando reactivos mtt modificados que emiten fluorescencia en lugar de color para una mayor sensibilidad
  • Adaptación del ensayo para medir la viabilidad bacteriana y la susceptibilidad a los antibióticos.
Relacionado con: Ensayo MTT, ensayo de citotoxicidad, viabilidad celular, ensayo colorimétrico, formazán, actividad mitocondrial, toxicología, cribado de fármacos, cribado de alto rendimiento, espectrofotometría.

Contexto histórico

Ensayo MTT para medir la viabilidad celular

1970
1975
1977
1983
1987
1990
1990
1970
1973
1975
1979
1983
1988
1990
1990

(Si la fecha es desconocida o no es relevante, por ejemplo "mecánica de fluidos", se proporciona una estimación redondeada de su aparición notable)

décimo año aniversario

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