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Ensaio MTT para medir a viabilidade celular

1983
  • Tim Mosmann
Cientista realizando o ensaio MTT em um laboratório de biologia celular para avaliar a viabilidade celular.

(Imagem gerada apenas para fins ilustrativos)

The MTT assay is a colorimetric method for assessing cell metabolic activity, which serves as a proxy for cell viability, proliferation, and citotoxicidade. Viable cells with active mitochondria contain reductase enzymes that convert the yellow tetrazolium salt MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) into an insoluble purple formazan. The amount of formazan produced is proportional to the number of living cells.

O ensaio MTT, descrito pela primeira vez por Tim Mosmann em 1983, revolucionou a forma como os pesquisadores quantificam as respostas celulares in vitro. Ele proporcionou uma alternativa mais rápida, quantitativa e menos radioativa aos métodos anteriores, como o ensaio de liberação de cromo. O princípio baseia-se na atividade das desidrogenases mitocondriais em células vivas. Essas enzimas fazem parte da cadeia de transporte de elétrons e só estão ativas em células metabolicamente funcionais.

In the procedure, the water-soluble yellow MTT reagent is added to cells in a culture plate. It is taken up by the cells and reduced by mitochondrial enzymes into formazan, which is an insoluble, purple, crystalline product. The formazan crystals accumulate within the cells. After an incubation period, a solubilizing agent, such as dimethyl sulfoxide (DMSO) or an acidified alcohol solution, is added to dissolve these crystals, resulting in a colored solution. The absorbance of this purple solution is then measured using a spectrophotometer at a specific wavelength (typically between 500 and 600 nm). The intensity of the color is directly proportional to the number of metabolically active, and therefore viable, cells. By comparing the absorbance of treated cells to untreated control cells, one can calculate the percentage of citotoxicidade or inhibition of proliferation caused by the test compound.

UNESCO Nomenclature: 2406
Biologia da célula

Tipo

Medical Procedure

Interrupção

Substancial

Uso

Uso generalizado

Precursores

  • desenvolvimento de técnicas de cultura celular
  • compreensão da respiração mitocondrial e da cadeia de transporte de elétrons
  • invenção do espectrofotômetro
  • uso de sais de tetrazólio como indicadores redox em histologia
  • necessidade de um ensaio quantitativo de viabilidade celular não radioativo

Aplicações

  • triagem de medicamentos para efeitos citotóxicos em pesquisas sobre câncer
  • testes toxicológicos de produtos químicos
  • avaliação da proliferação celular em resposta a fatores de crescimento
  • triagem de alto rendimento na descoberta de fármacos
  • biocompatibilidade testing of materials

Patentes:

NA

Ideias de Inovação Potencial

  • automated robotic systems for ultra-high-throughput mtt screening
  • development of similar, but water-soluble formazan assays (mts, xxt, wst-1) to simplify the protocol
  • multiplexing mtt assays with other assays (e.g., for apoptosis) in the same well
  • adaptation of the mtt assay for 3d cell cultures and organoids
  • microfluídica devices incorporating mtt-based viability checks
  • using mtt assays to screen for compounds that enhance mitochondrial function
  • developing mtt-based kits for home water toxicity testing
  • integrating mtt readouts into ai-driven drug discovery platforms
  • using modified mtt reagents that emit fluorescence instead of color for higher sensitivity
  • adapting the assay to measure bacterial viability and antibiotic susceptibility
Relacionado a: ensaio MTT, ensaio de citotoxicidade, viabilidade celular, ensaio colorimétrico, formazan, atividade mitocondrial, toxicologia, triagem de fármacos, triagem de alto rendimento, espectrofotometria.

Contexto histórico

Ensaio MTT para medir a viabilidade celular

1970
1975
1977
1983
1987
1990
1990
1970
1973
1975
1979
1983
1988
1990
1990

(Caso a data seja desconhecida ou irrelevante, por exemplo, "mecânica dos fluidos", é fornecida uma estimativa aproximada de seu surgimento notável)

10º ano aniversário

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