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Dosage MTT pour mesurer la viabilité cellulaire

1983
  • Tim Mosmann
Scientifique effectuant un test MTT dans un laboratoire de biologie cellulaire pour évaluer la viabilité des cellules.

Le test MTT est une méthode colorimétrique permettant d'évaluer l'activité métabolique des cellules, qui sert d'indicateur de l'activité métabolique. mandataire pour la viabilité, la prolifération et la cytotoxicité des cellules. Les cellules viables dont les mitochondries sont actives contiennent des enzymes réductases qui convertissent le sel jaune de tétrazolium MTT (bromure de 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium) en un formazan violet insoluble. La quantité de formazan produite est proportionnelle au nombre de cellules vivantes.

Le test MTT, décrit pour la première fois par Tim Mosmann en 1983, a révolutionné la façon dont les chercheurs quantifient les réponses cellulaires in vitro. Il offrait une alternative plus rapide, plus quantitative et moins radioactive aux méthodes précédentes comme le test de libération de chrome. Son principe repose sur l'activité des déshydrogénases mitochondriales dans les cellules vivantes. Ces enzymes font partie de la chaîne de transport d'électrons et ne sont actives que dans les cellules métaboliquement fonctionnelles.

Dans cette procédure, le réactif MTT jaune hydrosoluble est ajouté aux cellules dans une plaque de culture. Il est absorbé par les cellules et réduit par les enzymes mitochondriales en formazan, un produit cristallin violet insoluble. Les cristaux de formazan s'accumulent dans les cellules. Après une période d'incubation, un agent solubilisant, tel que le diméthylsulfoxyde (DMSO) ou une solution alcoolique acidifiée, est ajouté pour dissoudre ces cristaux, ce qui produit une solution colorée. L'absorbance de cette solution violette est ensuite mesurée à l'aide d'un spectrophotomètre à une longueur d'onde spécifique (généralement entre 500 et 600 nm). L'intensité de la couleur est directement proportionnelle au nombre de cellules métaboliquement actives, et donc viables. En comparant l'absorbance des cellules traitées à celle des cellules témoins non traitées, on peut calculer le pourcentage de cytotoxicité ou d'inhibition de la prolifération induite par le composé testé.

UNESCO Nomenclature: 2406
- Biologie de la cellule

Type

Procédure médicale

Perturbation

Important

Utilisation

Une utilisation répandue

Précurseurs

  • développement de techniques de culture cellulaire
  • compréhension de la respiration mitochondriale et de la chaîne de transport des électrons
  • invention du spectrophotomètre
  • utilisation des sels de tétrazolium comme indicateurs redox en histologie
  • besoin d'un test quantitatif et non radioactif de viabilité cellulaire

Applications

  • dépistage des effets cytotoxiques des médicaments dans la recherche sur le cancer
  • tests toxicologiques des produits chimiques
  • évaluer la prolifération cellulaire en réponse aux facteurs de croissance
  • criblage à haut débit dans la découverte de médicaments
  • tests de biocompatibilité des matériaux

Brevets :

NA

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En rapport avec : Test MTT, test de cytotoxicité, viabilité cellulaire, test colorimétrique, formazan, activité mitochondriale, toxicologie, criblage de médicaments, criblage à haut débit, spectrophotométrie.

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