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Polymerase-Kettenreaktion (PCR)

1983
  • Kary Mullis
Thermocycler zur Amplifikation von DNA in einem molekularbiologischen Labor.

(Abbildung dient nur zur Veranschaulichung)

Die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) ist eine Labortechnik zur Vervielfältigung eines spezifischen DNA-Abschnitts, wodurch aus einer kleinen Ausgangsprobe Millionen bis Milliarden von Kopien erzeugt werden. Verfahren basiert auf thermischen Zyklen, die aus wiederholten Erhitzungs- und Abkühlungszyklen für das Schmelzen der DNA, das Anlagern der Primer und die enzymatische Replikation der DNA mithilfe einer thermostabilen DNA-Polymerase bestehen, was zu einer exponentiellen Amplifikation führt.

The Polymerase Chain Reaction (PCR) is a revolutionary in vitro method for exponentially amplifying a specific target DNA sequence. Its power lies in its ability to generate billions of copies from a minute starting quantity of DNA, making it possible to analyze DNA from samples as small as a single cell. The process is driven by a series of temperature changes, or thermal cycles, managed by a machine called a thermal cycler. Each cycle consists of three core steps. First, Denaturation: the reaction mixture is heated to 94–98 °C for a short period, causing the double-stranded DNA template to separate into single strands. Second, Annealing: the temperature is lowered to 50–65 °C, allowing short, single-stranded DNA primers to bind (anneal) to their complementary sequences on the now single-stranded template DNA. These primers flank the target region to be amplified. Third, Extension: the temperature is raised to 72 °C, the optimal temperature for the key enzyme, a thermostable DNA polymerase, to work. The most commonly used is Taq polymerase, isolated from the thermophilic bacterium *Thermus aquaticus*. The polymerase binds to the primer-template complex and begins synthesizing a new complementary DNA strand, extending from the primer. This three-step cycle is repeated 20-40 times. With each cycle, the number of copies of the target DNA sequence doubles, leading to an exponential amplification, mathematically described as [latex]2^n[/latex], where n is the number of cycles. The result is a solution containing a vast quantity of the specific DNA fragment, which can then be easily visualized by gel electrophoresis or used in subsequent molecular biology applications like sequencing or cloning.

UNESCO Nomenclature: 2406
- Molekularbiologie

Typ

Chemischer Prozess

Störung

Revolutionär

Verwendung

Weitverbreitete Verwendung

Vorläufer

  • Entdeckung der DNA-Struktur
  • Verständnis der DNA-Replikationsprinzipien
  • Isolierung von DNA-Polymerase-Enzymen
  • Entdeckung thermostabiler Organismen und ihrer Enzyme (z. B. Taq-Polymerase)
  • Entwicklung der Oligonukleotidsynthese für Primer

Anwendungen

  • DNA-Fingerabdruck für die Forensik
  • medizinische Diagnostik bei Infektionskrankheiten (z. B. COVID-19)
  • genetische Tests auf Erbkrankheiten
  • Klonen von Genen
  • Sequenzierung von Genomen
  • phylogenetische Analyse

Patente:

  • US4683195
  • US4683202
  • US4965188

Potenzielle Innovationsideen

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Verwandt mit: PCR, Polymerase-Kettenreaktion, DNA-Amplifikation, Kary Mullis, Taq-Polymerase, Thermocyclierung, Forensik, Diagnostik, molekulares Klonen, Gentests.

Historischer Kontext

Polymerase-Kettenreaktion (PCR)

1973
1975
1979
1983
1988
1990
1990
1970
1975
1977
1983
1987
1990
1990
1990

(wenn das Datum unbekannt oder nicht relevant ist, z. B. „Strömungsmechanik“, wird eine gerundete Schätzung seines bemerkenswerten Auftretens bereitgestellt)

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