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Southern Blot

1975
  • Edwin Southern
Laborszene zur Demonstration der Southern-Blot-Technik für die DNA-Analyse in der Molekulargenetik.

(Abbildung dient nur zur Veranschaulichung)

Der Southern Blot ist ein Verfahren Dieses Verfahren dient dem Nachweis einer spezifischen DNA-Sequenz in einer DNA-Probe. Es kombiniert die Übertragung elektrophoretisch getrennter DNA-Fragmente auf eine Filtermembran mit dem anschließenden Nachweis der Fragmente mithilfe einer markierten DNA-Sonde. Die Technik ermöglicht es Forschern, ein spezifisches Gen innerhalb eines komplexen DNA-Gemisches anhand seiner Größe und Sequenz zu identifizieren.

Der Southern Blot, benannt nach seinem Erfinder Edwin Southern, ist eine leistungsstarke und spezifische Methode zum Nachweis einer Ziel-DNA-Sequenz in einem komplexen DNA-Gemisch. Er war eine grundlegende Technik in der Molekulargenetik vor der weitverbreiteten Anwendung von … PCR and sequencing. The process is a multi-step procedure that combines size separation with specific molecular recognition. It begins with the digestion of the total genomic DNA sample using one or more restriction enzymes, which cleaves the DNA into fragments of varying sizes. These fragments are then separated according to their size by agarose gel electrophoresis. The gel now contains a smear of countless DNA fragments, sorted by length. The crucial next step is the transfer, or ‘blotting,’ of these separated DNA fragments from the fragile gel onto a more durable membrane, typically made of nitrocellulose or nylon. This is achieved through capillary action, which wicks a buffer solution through the gel and the membrane, carrying the DNA along with it and immobilizing it on the membrane’s surface. The DNA is first denatured into single strands so it can bind to the probe. The membrane now holds a faithful replica of the DNA fragment pattern from the gel. To find the specific gene of interest among the thousands of fragments, a labeled probe is used. This probe is a single-stranded piece of DNA (or RNA) that has a sequence complementary to the target gene and is tagged with a marker, such as a radioactive isotope ([latex]^{32}P[/latex]) or a fluorescent/chemiluminescent molecule. The membrane is incubated with this probe, which hybridizes (forms a double helix) only with its complementary DNA fragment on the membrane. After washing away any unbound probe, the location of the hybridized probe is detected, revealing a band that corresponds to the size of the DNA fragment containing the target gene.

UNESCO Nomenclature: 2406
- Molekularbiologie

Typ

Chemischer Prozess

Störung

Inkremental

Verwendung

Nische/Spezialisiert

Vorläufer

  • gel Elektrophorese for DNA separation
  • Entdeckung von Restriktionsenzymen
  • Verständnis der Prinzipien der DNA-Hybridisierung
  • Entwicklung radioaktiver Markierungstechniken für Sonden
  • Techniken zur Herstellung von Nitrocellulosemembranen

Anwendungen

  • Genkartierung
  • Diagnose genetischer Erkrankungen (z. B. Sichelzellenanämie)
  • Identifizierung von Genmutationen oder -umlagerungen
  • forensische DNA-Analyse (RFLP)
  • Vaterschaftstest
  • Nachweis von Transgenen in GVO

Patente:

NA

Potenzielle Innovationsideen

  • Northern Blotting für RNA-Analyse
  • Western Blotting zur Proteinanalyse
  • Eastern Blotting zur posttranslationalen Modifikationsanalyse
  • Dot-Blot und Slot-Blot für einfachere Quantifizierung ohne Größentrennung
  • Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung (FISH) zur Visualisierung von DNA-Sequenzen in Chromosomen
  • Microarray-Technologie, die wie eine miniaturisierte, parallele Version eines Dot-Blots ist
  • development of non-radioactive probes (e.g., using Chemilumineszenz or fluorescence)
  • digital detection methods that bypass the need for Film
  • Verwendung in frühen DNA-Fingerprinting-Techniken
  • Anpassung für Diagnosekits für genetische Erkrankungen
Verwandt mit: Southern Blot, Edwin Southern, DNA-Nachweis, Hybridisierung, DNA-Sonde, RFLP, Blotting Molekularbiologie, Genidentifizierung, Elektrophorese.

Historischer Kontext

Southern Blot

1960
1970
1973
1975
1979
1983
1988
1960
1967
1970
1975
1977
1983
1987
1990

(wenn das Datum unbekannt oder nicht relevant ist, z. B. „Strömungsmechanik“, wird eine gerundete Schätzung seines bemerkenswerten Auftretens bereitgestellt)

10. Jahr Jubiläum

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