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Réaction en chaîne par polymérase (PCR)

1983
  • Kary Mullis
Thermocycleur amplifiant l'ADN dans un laboratoire de biologie moléculaire.

(Image générée à titre d'illustration uniquement)

La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une technique de laboratoire utilisée pour amplifier un segment spécifique d'ADN, générant des millions voire des milliards de copies à partir d'un petit échantillon initial. méthode repose sur un cycle thermique, consistant en des cycles répétés de chauffage et de refroidissement pour la fusion de l'ADN, l'hybridation des amorces et la réplication enzymatique de l'ADN à l'aide d'une ADN polymérase thermostable, ce qui entraîne une amplification exponentielle.

La réaction en chaîne de la polymérase (PCR) est une méthode in vitro révolutionnaire qui permet d'amplifier de manière exponentielle une séquence d'ADN cible spécifique. Sa puissance réside dans sa capacité à générer des milliards de copies à partir d'une infime quantité d'ADN, ce qui permet d'analyser l'ADN d'échantillons aussi petits qu'une seule cellule. Le processus est régi par une série de changements de température, ou cycles thermiques, gérés par une machine appelée thermocycleur. Chaque cycle se compose de trois étapes principales. Premièrement, la dénaturation : le mélange réactionnel est chauffé à 94-98 °C pendant une courte période, ce qui a pour effet de séparer la matrice d'ADN double brin en brins simples. Deuxièmement, le recuit : la température est abaissée à 50-65 °C, ce qui permet à de courtes amorces d'ADN simple brin de se lier (recuit) à leurs séquences complémentaires sur l'ADN matrice désormais simple brin. Ces amorces encadrent la région cible à amplifier. Troisièmement, l'extension : la température est portée à 72 °C, la température optimale pour que l'enzyme clé, une ADN polymérase thermostable, puisse agir. La plus couramment utilisée est la Taq polymérase, isolée de la bactérie thermophile *Thermus aquaticus*. La polymérase se lie au complexe amorce-modèle et commence à synthétiser un nouveau brin d'ADN complémentaire, qui s'étend à partir de l'amorce. Ce cycle en trois étapes est répété 20 à 40 fois. À chaque cycle, le nombre de copies de la séquence d'ADN cible double, ce qui entraîne une amplification exponentielle, décrite mathématiquement comme [latex]2^n[/latex], où n est le nombre de cycles. Le résultat est une solution contenant une grande quantité du fragment d'ADN spécifique, qui peut alors être facilement visualisé par électrophorèse sur gel ou utilisé dans des applications ultérieures de biologie moléculaire telles que le séquençage ou le clonage.

UNESCO Nomenclature: 2406
- Biologie moléculaire

Taper

Procédé chimique

Perturbation

Révolutionnaire

Usage

Utilisation généralisée

Précurseurs

  • découverte de la structure de l'ADN
  • compréhension des principes de réplication de l'ADN
  • isolement des enzymes ADN polymérase
  • découverte d'organismes thermostables et de leurs enzymes (par exemple, la Taq polymérase)
  • développement de la synthèse d'oligonucléotides pour les amorces

Applications

  • Empreintes génétiques pour la médecine légale
  • diagnostics médicaux pour les maladies infectieuses (par exemple, la COVID-19)
  • tests génétiques pour les maladies héréditaires
  • clonage de gènes
  • séquençage des génomes
  • analyse phylogénétique

Brevets:

  • US4683195
  • US4683202
  • US4965188

Idées d'innovations potentielles

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En rapport avec : PCR, réaction en chaîne de la polymérase, amplification de l'ADN, kary mullis, taq polymérase, cyclage thermique, médecine légale, diagnostics, clonage moléculaire, tests génétiques.

Contexte historique

Réaction en chaîne par polymérase (PCR)

1973
1975
1979
1983
1988
1990
1990
1970
1975
1977
1983
1987
1990
1990
1990

(si la date est inconnue ou non pertinente, par exemple « mécanique des fluides », une estimation arrondie de son émergence notable est fournie)

Inventions, innovations et principes techniques connexes

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