Réaction en chaîne par polymérase (PCR)
La réaction en chaîne par polymérase (PCR) est une technique de laboratoire utilisée pour amplifier un segment spécifique d'ADN, générant des millions voire des milliards de copies à partir d'un petit échantillon initial. méthode repose sur un cycle thermique, consistant en des cycles répétés de chauffage et de refroidissement pour la fusion de l'ADN, l'hybridation des amorces et la réplication enzymatique de l'ADN à l'aide d'une ADN polymérase thermostable, ce qui entraîne une amplification exponentielle.
La réaction en chaîne de la polymérase (PCR) est une méthode in vitro révolutionnaire qui permet d'amplifier de manière exponentielle une séquence d'ADN cible spécifique. Sa puissance réside dans sa capacité à générer des milliards de copies à partir d'une infime quantité d'ADN, ce qui permet d'analyser l'ADN d'échantillons aussi petits qu'une seule cellule. Le processus est régi par une série de changements de température, ou cycles thermiques, gérés par une machine appelée thermocycleur. Chaque cycle se compose de trois étapes principales. Premièrement, la dénaturation : le mélange réactionnel est chauffé à 94-98 °C pendant une courte période, ce qui a pour effet de séparer la matrice d'ADN double brin en brins simples. Deuxièmement, le recuit : la température est abaissée à 50-65 °C, ce qui permet à de courtes amorces d'ADN simple brin de se lier (recuit) à leurs séquences complémentaires sur l'ADN matrice désormais simple brin. Ces amorces encadrent la région cible à amplifier. Troisièmement, l'extension : la température est portée à 72 °C, la température optimale pour que l'enzyme clé, une ADN polymérase thermostable, puisse agir. La plus couramment utilisée est la Taq polymérase, isolée de la bactérie thermophile *Thermus aquaticus*. La polymérase se lie au complexe amorce-modèle et commence à synthétiser un nouveau brin d'ADN complémentaire, qui s'étend à partir de l'amorce. Ce cycle en trois étapes est répété 20 à 40 fois. À chaque cycle, le nombre de copies de la séquence d'ADN cible double, ce qui entraîne une amplification exponentielle, décrite mathématiquement comme [latex]2^n[/latex], où n est le nombre de cycles. Le résultat est une solution contenant une grande quantité du fragment d'ADN spécifique, qui peut alors être facilement visualisé par électrophorèse sur gel ou utilisé dans des applications ultérieures de biologie moléculaire telles que le séquençage ou le clonage.
UNESCO Nomenclature: 2406
- Biologie moléculaire
Perturbation
Révolutionnaire
Usage
Utilisation généralisée
Précurseurs
- découverte de la structure de l'ADN
- compréhension des principes de réplication de l'ADN
- isolement des enzymes ADN polymérase
- découverte d'organismes thermostables et de leurs enzymes (par exemple, la Taq polymérase)
- développement de la synthèse d'oligonucléotides pour les amorces
Applications
- Empreintes génétiques pour la médecine légale
- diagnostics médicaux pour les maladies infectieuses (par exemple, la COVID-19)
- tests génétiques pour les maladies héréditaires
- clonage de gènes
- séquençage des génomes
- analyse phylogénétique
Brevets:
- US4683195
- US4683202
- US4965188
Idées d'innovations potentielles
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En rapport avec : PCR, réaction en chaîne de la polymérase, amplification de l'ADN, kary mullis, taq polymérase, cyclage thermique, médecine légale, diagnostics, clonage moléculaire, tests génétiques.