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Électrophorèse

1970
  • Arne Tiselius
Appareil d'électrophorèse sur gel de laboratoire séparant les échantillons d'ADN en fonction de leur taille.

(Image générée à titre d'illustration uniquement)

L'électrophorèse sur gel est une technique utilisée pour séparer des macromolécules comme l'ADN, l'ARN et les protéines en fonction de leur taille et de leur charge. Un champ électrique est appliqué à une matrice de gel, provoquant le déplacement des molécules chargées négativement (comme l'ADN) vers l'électrode positive. Les molécules plus petites migrent plus rapidement et plus loin à travers les pores du gel que les molécules plus grosses.

L'électrophorèse sur gel est une technique fondamentale en biologie moléculaire pour la séparation et l'analyse des macromolécules, principalement l'ADN, l'ARN et les protéines. Le principe de cette technique est la migration de molécules chargées à travers une matrice de gel poreux sous l'influence d'un champ électrique. Les acides nucléiques (ADN et ARN) ayant une charge négative constante en raison de leur squelette phosphate, ils migreront naturellement vers l'électrode positive (anode) lorsqu'un courant est appliqué. Le gel lui-même, généralement constitué d'agarose pour les molécules plus grosses comme les fragments d'ADN génomique ou de polyacrylamide pour les fragments plus petits et les protéines (dans une technique appelée PAGE), agit comme un tamis moléculaire. La matrice est composée d'un réseau de pores à travers lesquels les molécules doivent se déplacer. Les petites molécules naviguent dans ce labyrinthe plus facilement et plus rapidement que les grosses molécules, qui sont davantage entravées par la matrice du gel. Par conséquent, les molécules sont séparées en fonction de leur taille, les plus petites parcourant la plus grande distance depuis le point de départ (le puits) dans un temps donné. Pour réaliser l'électrophorèse de l'ADN, un échantillon est d'abord placé dans les puits situés à une extrémité du gel. Une ‘échelle d'ADN’, un mélange de fragments d'ADN de taille connue, est placée dans une voie séparée afin de servir de référence pour l'estimation de la taille des fragments inconnus. Après l'application d'un courant électrique pendant un certain temps, les fragments séparés sont visualisés. L'ADN étant invisible à l'œil nu, on utilise un colorant fluorescent qui s'intercale avec l'ADN, tel que le bromure d'éthidium ou le SYBR Green. Lorsqu'il est placé sous une lumière UV, le colorant devient fluorescent, révélant l'ADN sous forme de bandes distinctes, chaque bande représentant une collection de fragments de la même taille.

UNESCO Nomenclature: 2401
- Biochimie

Taper

Processus physique

Perturbation

Fondamentaux

Usage

Utilisation généralisée

Précurseurs

  • Les lois de l'électrolyse de Michael Faraday
  • découverte de l'électricité
  • Développement par Arne Tiselius de l'électrophorèse à frontière mobile
  • développement de supports tels que le papier, l'amidon et éventuellement les gels d'agarose/polyacrylamide
  • découverte de l'ADN et de sa charge négative

Applications

  • Empreintes génétiques
  • test de paternité
  • diagnostiquer les troubles génétiques
  • purification de fragments d'ADN pour le clonage
  • analyse des produits PCR
  • analyse des protéines (SDS-PAGE)

Brevets:

NA

Idées d'innovations potentielles

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En rapport avec : électrophorèse sur gel, séparation de l'ADN, gel d'agarose, polyacrylamide, SDS-PAGE, empreinte ADN, poids moléculaire, fragments de restriction, acides nucléiques, protéines.

Contexte historique

Électrophorèse

1954
1960
1967
1970
1975
1977
1983
1951
1958
1960
1970
1973
1975
1979
1983

(si la date est inconnue ou non pertinente, par exemple « mécanique des fluides », une estimation arrondie de son émergence notable est fournie)

Inventions, innovations et principes techniques connexes

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