Ensayo MTT para medir la viabilidad celular
El ensayo MTT es un ensayo colorimétrico. método para evaluar la actividad metabólica celular, que sirve como apoderado para la viabilidad, proliferación y citotoxicidad celular. Las células viables con mitocondrias activas contienen enzimas reductasas que convierten la sal de tetrazolio amarilla MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio) en formazán púrpura insoluble. La cantidad de formazán producida es proporcional al número de células vivas.
El ensayo MTT, descrito por primera vez por Tim Mosmann en 1983, revolucionó la forma en que los investigadores cuantifican las respuestas celulares in vitro. Proporcionó una alternativa más rápida, cuantitativa y menos radiactiva a métodos anteriores, como el ensayo de liberación de cromo. El principio se basa en la actividad de las deshidrogenasas mitocondriales en células vivas. Estas enzimas forman parte de la cadena de transporte de electrones y solo están activas en células con función metabólica.
En el procedimiento, el reactivo MTT amarillo soluble en agua se añade a las células en una placa de cultivo. Es absorbido por las células y reducido por enzimas mitocondriales a formazán, un producto cristalino púrpura insoluble. Los cristales de formazán se acumulan dentro de las células. Tras un periodo de incubación, se añade un agente solubilizante, como dimetilsulfóxido (DMSO) o una solución de alcohol acidificado, para disolver estos cristales, obteniendo una solución coloreada. La absorbancia de esta solución púrpura se mide entonces con un espectrofotómetro a una longitud de onda específica (normalmente entre 500 y 600 nm). La intensidad del color es directamente proporcional al número de células metabólicamente activas y, por tanto, viables. Comparando la absorbancia de las células tratadas con la de las células de control sin tratar, se puede calcular el porcentaje de citotoxicidad o inhibición de la proliferación causada por el compuesto de prueba.
UNESCO Nomenclature: 2406
- Biología celular
Tipo
Procedimiento médico
Precursores
- desarrollo de técnicas de cultivo celular
- Comprensión de la respiración mitocondrial y la cadena de transporte de electrones
- invención del espectrofotómetro
- Uso de sales de tetrazolio como indicadores redox en histología
- Necesidad de un ensayo de viabilidad celular cuantitativo y no radiactivo
Aplicaciones
- Detección de fármacos con efectos citotóxicos en la investigación del cáncer
- pruebas toxicológicas de productos químicos
- evaluación de la proliferación celular en respuesta a factores de crecimiento
- cribado de alto rendimiento en el descubrimiento de fármacos
- pruebas de biocompatibilidad de materiales
Ideas para posibles innovaciones
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Relacionado con: Ensayo MTT, ensayo de citotoxicidad, viabilidad celular, ensayo colorimétrico, formazán, actividad mitocondrial, toxicología, cribado de fármacos, cribado de alto rendimiento, espectrofotometría.