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細胞生存率を測定するためのMTTアッセイ

1983
  • Tim Mosmann
細胞生物学の研究室で、細胞の生存率を評価するためのMTTアッセイを行う科学者。.

(画像はイメージです)

MTTアッセイは比色法である 方法 細胞の代謝活動を評価するために、 プロキシ 細胞の生存率、増殖、および細胞毒性を評価するために用いられます。活性ミトコンドリアを持つ生存細胞には、黄色のテトラゾリウム塩MTT(3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド)を不溶性の紫色のホルマザンに変換する還元酵素が含まれています。生成されるホルマザンの量は、生細胞の数に比例します。

1983年にティム・モスマンによって初めて発表されたMTTアッセイは、研究者が試験管内で細胞応答を定量化する方法に革命をもたらしました。これは、クロム放出アッセイなどの従来の方法に比べて、より迅速で定量性が高く、放射性物質の使用量が少ない代替手段となりました。その原理は、生細胞内のミトコンドリア脱水素酵素の活性に基づいています。これらの酵素は電子伝達系の一部であり、代謝的に機能している細胞でのみ活性を示します。

この手順では、水溶性の黄色いMTT試薬を培養プレート内の細胞に添加します。細胞はこれを取り込み、ミトコンドリア酵素によって還元されて、不溶性の紫色の結晶性生成物であるホルマザンを生成します。ホルマザン結晶は細胞内に蓄積されます。一定時間培養した後、ジメチルスルホキシド(DMSO)や酸性アルコール溶液などの溶解剤を添加してこれらの結晶を溶解させ、着色溶液を得ます。この紫色の溶液の吸光度を分光光度計を用いて特定の波長(通常500~600 nm)で測定します。色の濃さは、代謝活性があり生存可能な細胞の数に正比例します。処理した細胞の吸光度を未処理の対照細胞の吸光度と比較することで、試験化合物によって引き起こされる細胞毒性または増殖阻害の割合を算出できます。

UNESCO Nomenclature: 2406
細胞生物学

タイプ

医療処置

混乱

実質的な

使用法

広く普及している

前駆物質

  • 細胞培養技術の開発
  • ミトコンドリア呼吸と電子伝達系の理解
  • 分光光度計の発明
  • 組織学における酸化還元指示薬としてのテトラゾリウム塩の使用
  • 定量的かつ非放射性の細胞生存率アッセイの必要性

アプリケーション

  • がん研究における細胞毒性効果の薬剤スクリーニング
  • 化学物質の毒性試験
  • 成長因子に対する細胞増殖反応の評価
  • 創薬におけるハイスループットスクリーニング
  • 材料の生体適合性試験

特許:

NA

潜在的なイノベーションのアイデア

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歴史的背景

細胞生存率を測定するためのMTTアッセイ

1970
1975
1977
1983
1987
1990
1990
1970
1973
1975
1979
1983
1988
1990
1990

(日付が不明または関連性がない場合、例えば「流体力学」などでは、その注目すべき出現時期の概算値が提示されます。)

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