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Ensaio MTT para medir a viabilidade celular

1983
  • Tim Mosmann
Cientista realizando o ensaio MTT em um laboratório de biologia celular para avaliar a viabilidade celular.

(Imagem gerada apenas para fins ilustrativos)

O ensaio MTT é um ensaio colorimétrico. método para avaliar a atividade metabólica celular, que serve como um proxy para viabilidade celular, proliferação e citotoxicidade. Células viáveis ​​com mitocôndrias ativas contêm enzimas redutases que convertem o sal de tetrazólio amarelo MTT (brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio) em um formazano púrpura insolúvel. A quantidade de formazano produzida é proporcional ao número de células vivas.

O ensaio MTT, descrito pela primeira vez por Tim Mosmann em 1983, revolucionou a forma como os pesquisadores quantificam as respostas celulares in vitro. Ele proporcionou uma alternativa mais rápida, quantitativa e menos radioativa aos métodos anteriores, como o ensaio de liberação de cromo. O princípio baseia-se na atividade das desidrogenases mitocondriais em células vivas. Essas enzimas fazem parte da cadeia de transporte de elétrons e só estão ativas em células metabolicamente funcionais.

No procedimento, o reagente amarelo solúvel em água MTT é adicionado às células em uma placa de cultura. Ele é absorvido pelas células e reduzido por enzimas mitocondriais a formazan, um produto cristalino insolúvel de cor púrpura. Os cristais de formazan se acumulam dentro das células. Após um período de incubação, um agente solubilizante, como dimetilsulfóxido (DMSO) ou uma solução alcoólica acidificada, é adicionado para dissolver esses cristais, resultando em uma solução colorida. A absorbância dessa solução púrpura é então medida usando um espectrofotômetro em um comprimento de onda específico (tipicamente entre 500 e 600 nm). A intensidade da cor é diretamente proporcional ao número de células metabolicamente ativas e, portanto, viáveis. Comparando a absorbância das células tratadas com a das células controle não tratadas, pode-se calcular a porcentagem de citotoxicidade ou inibição da proliferação causada pelo composto testado.

UNESCO Nomenclature: 2406
Biologia da célula

Tipo

Medical Procedure

Interrupção

Substancial

Uso

Uso generalizado

Precursores

  • desenvolvimento de técnicas de cultura celular
  • compreensão da respiração mitocondrial e da cadeia de transporte de elétrons
  • invenção do espectrofotômetro
  • uso de sais de tetrazólio como indicadores redox em histologia
  • necessidade de um ensaio quantitativo de viabilidade celular não radioativo

Aplicações

  • triagem de medicamentos para efeitos citotóxicos em pesquisas sobre câncer
  • testes toxicológicos de produtos químicos
  • avaliação da proliferação celular em resposta a fatores de crescimento
  • triagem de alto rendimento na descoberta de fármacos
  • testes de biocompatibilidade de materiais

Patentes:

NA

Ideias de Inovação Potencial

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Relacionado a: ensaio MTT, ensaio de citotoxicidade, viabilidade celular, ensaio colorimétrico, formazan, atividade mitocondrial, toxicologia, triagem de fármacos, triagem de alto rendimento, espectrofotometria.

Contexto histórico

Ensaio MTT para medir a viabilidade celular

1970
1975
1977
1983
1987
1990
1990
1970
1973
1975
1979
1983
1988
1990
1990

(Caso a data seja desconhecida ou irrelevante, por exemplo, "mecânica dos fluidos", é fornecida uma estimativa aproximada de seu surgimento notável)

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