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Tache du Sud

1975
  • Edwin Southern
Scène de laboratoire démontrant la technique du Southern blot pour l'analyse de l'ADN en génétique moléculaire.

(Image générée à titre d'illustration uniquement)

Le Southern blot est un méthode Cette technique est utilisée pour la détection d'une séquence d'ADN spécifique dans un échantillon d'ADN. Elle combine le transfert de fragments d'ADN séparés par électrophorèse sur une membrane filtrante avec la détection subséquente de ces fragments par une sonde d'ADN marquée. Elle permet aux chercheurs d'identifier un gène spécifique au sein d'un mélange d'ADN complexe, en fonction de sa taille et de sa séquence.

The Southern blot, named after its inventor Edwin Southern, is a powerful and specific method for detecting a target DNA sequence within a complex mixture of DNA. It was a foundational technique in molecular genetics before the widespread adoption of PCR and sequencing. The process is a multi-step procedure that combines size separation with specific molecular recognition. It begins with the digestion of the total genomic DNA sample using one or more restriction enzymes, which cleaves the DNA into fragments of varying sizes. These fragments are then separated according to their size by agarose gel electrophoresis. The gel now contains a smear of countless DNA fragments, sorted by length. The crucial next step is the transfer, or ‘blotting,’ of these separated DNA fragments from the fragile gel onto a more durable membrane, typically made of nitrocellulose or nylon. This is achieved through capillary action, which wicks a buffer solution through the gel and the membrane, carrying the DNA along with it and immobilizing it on the membrane’s surface. The DNA is first denatured into single strands so it can bind to the probe. The membrane now holds a faithful replica of the DNA fragment pattern from the gel. To find the specific gene of interest among the thousands of fragments, a labeled probe is used. This probe is a single-stranded piece of DNA (or RNA) that has a sequence complementary to the target gene and is tagged with a marker, such as a radioactive isotope ([latex]^{32}P[/latex]) or a fluorescent/chemiluminescent molecule. The membrane is incubated with this probe, which hybridizes (forms a double helix) only with its complementary DNA fragment on the membrane. After washing away any unbound probe, the location of the hybridized probe is detected, revealing a band that corresponds to the size of the DNA fragment containing the target gene.

UNESCO Nomenclature: 2406
- Biologie moléculaire

Taper

Procédé chimique

Perturbation

Incrémentale

Usage

Créneau/spécialité

Précurseurs

  • électrophorèse sur gel pour la séparation de l'ADN
  • découverte des enzymes de restriction
  • compréhension des principes d'hybridation de l'ADN
  • développement de techniques de marquage radioactif des sondes
  • techniques de création de membranes de nitrocellulose

Applications

  • cartographie génétique
  • diagnostiquer des maladies génétiques (par exemple, la drépanocytose)
  • identifier les mutations ou les réarrangements génétiques
  • analyse ADN médico-légale (RFLP)
  • test de paternité
  • détection de transgènes dans les OGM

Brevets:

NA

Idées d'innovations potentielles

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Related to: Southern blot, Edwin Southern, DNA detection, hybridization, DNA probe, RFLP, blotting, molecular biology, gene identification, electrophoresis.

Contexte historique

Tache du Sud

1960
1970
1973
1975
1979
1983
1988
1960
1967
1970
1975
1977
1983
1987
1990

(si la date est inconnue ou non pertinente, par exemple « mécanique des fluides », une estimation arrondie de son émergence notable est fournie)

Inventions, innovations et principes techniques connexes

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