Product Design, Manufacturing & Innovation Resources
بيت » النمط المجاور للفاصل الأولي (PAM)

النمط المجاور للفاصل الأولي (PAM)

2008
  • Luciano Marraffini
  • Erik Sontheimer
عالم أحياء جزيئية يقوم بتحليل تسلسل الحمض النووي مع التركيز على بروتوسباسيتر متجاور في المختبر.

(صورة تم إنشاؤها للتوضيح فقط)

النمط المجاور للبروتوسبيسر (PAM) هو تسلسل DNA قصير ومحدد، يتراوح طوله عادةً بين 2 و6 أزواج قاعدية، وهو ضروري لكي يرتبط إنزيم Cas النيوكليازي بتسلسل DNA المستهدف ويقطعه. يقع هذا النمط مباشرةً بعد موقع الهدف (البروتوسبيسر) في DNA الغازي. لا يوجد النمط PAM في الحمض النووي الخاص بالخلية المضيفة. كريسبر الموضع، الذي يعمل كآلية حاسمة للتعرف على الذات مقابل غير الذات، مما يمنع التدمير المناعي الذاتي.

كان اكتشاف النمط المجاور للبروتوسبيسر (PAM) لحظةً محوريةً في فهم كيفية عمل نظام CRISPR-Cas بهذه الدقة. لاحظ الباحثون أنه لكي يستهدف النظام الحمض النووي الغريب ويقطعه بنجاح، يجب أن يكون هناك تسلسل قصير محدد بجوار التسلسل المستهدف (البروتوسبيسر). بالنسبة لبروتين Cas9 واسع الاستخدام من *Streptococcus pyogenes*، يكون هذا التسلسل 5'-NGG-3'، حيث يمكن أن يكون 'N' أي نيوكليوتيد. يقوم بروتين Cas9، المحمل بـ RNA الدليل الخاص به، بمسح الحمض النووي بحثًا عن تسلسل PAM هذا. فقط عند ارتباطه بـ PAM، يحاول البروتين فك الحمض النووي المجاور واختبار تطابقه مع تسلسل RNA الدليل الخاص به. إذا تم العثور على تطابق، يتم تنشيط نطاقات النيوكلياز في Cas9 لإحداث قطع مزدوج في الحمض النووي.

تُعدّ آلية الاستهداف المعتمدة على تسلسل PAM هذه مفتاحًا أساسيًا لتجنب النظام مهاجمة جينوم البكتيريا نفسه. تحتوي مصفوفة CRISPR، التي تُشتق منها جزيئات الحمض النووي الريبوزي الدليلية، على نفس تسلسلات الفواصل الموجودة في الأهداف. مع ذلك، لا تحتوي التسلسلات المتكررة داخل مصفوفة CRISPR على تسلسل PAM. ونتيجةً لذلك، لا يستطيع مُركّب Cas9-gRNA الارتباط بثبات بموقع CRISPR نفسه، مما يمنع حدوث كارثة مناعية ذاتية. يُعدّ هذا الحل المبتكر للتمييز بين الذات وغير الذات سمةً مميزةً لكفاءة النظام. بالنسبة لتطبيقات تحرير الجينات، يُمثّل شرط PAM سلاحًا ذا حدين: فهو يضمن الخصوصية ولكنه يُقيّد أيضًا مجموعة مواقع الاستهداف المُحتملة في الجينوم. وقد دفع هذا الأمر إلى إجراء أبحاث مكثفة لاكتشاف أو هندسة مُتغيرات Cas ذات متطلبات PAM مختلفة، أو أكثر مرونة، أو حتى معدومة، لجعل أي جزء من الجينوم قابلًا للتحرير.

UNESCO Nomenclature: 2417
علم الأحياء الجزيئي

يكتب

الآلية الكيميائية الحيوية

الاضطراب

كبير

الاستخدام

الاستخدام الواسع النطاق

السلائف

  • characterization of the crispr-cas9 system’s components
  • فهم تفاعلات ربط البروتين بالحمض النووي وخصوصيتها
  • فرضية كريسبر كجهاز مناعي يستهدف الحمض النووي
  • اختبارات في المختبر لاختبار نشاط بروتين CAS على ركائز مختلفة من الحمض النووي

التطبيقات

  • قاعدة حاسمة لتصميم الحمض النووي الريبوزي الدليلي في تحرير الجينات باستخدام CRISPR-Cas9
  • تمكين التنبؤ بالمواقع المحتملة غير المستهدفة في الجينوم
  • هندسة بروتينات CAS بخصائص PAM معدلة لتوسيع نطاق المواقع الجينومية القابلة للتعديل
  • أساس لتطوير متغيرات cas9 عالية الدقة التي تقلل من التأثيرات غير المستهدفة

براءات الاختراع:

NA

أفكار ابتكارات محتملة

بسبب عمليات جمع البيانات من خلال برامج الروبوت، والتي تتجاوز حاليًا 40 ألفًا يوميًا، فإن هذا المحتوى مخصص لأعضاء المجتمع فقط.
> تسجيل الدخول < أو > سجل < (مجاني 100٪) للوصول إلى هذا، وكذلك جميع المحتويات والأدوات الأخرى المقيدة.

ذات صلة بـ: PAM، النمط المجاور للبروتوسبيسر، cas9، التعرف الذاتي، استهداف الحمض النووي، تحرير الجينات، s. pyogenes، خارج الهدف، الكيمياء الحيوية، NGG.

السياق التاريخي

النمط المجاور للفاصل الأولي (PAM)

1990
1997
2000
2008
1990
1990
1997
2000

(إذا كان التاريخ غير معروف أو غير ذي صلة، على سبيل المثال "ميكانيكا الموائع"، يتم توفير تقدير تقريبي لظهوره الملحوظ)

الاختراع والابتكار والمبادئ التقنية ذات الصلة

الصور بالحجم الكامل والتنزيلات متاحة فقط 100% مجاناً للأعضاء المسجلين.