原间隔序列邻近基序 (PAM) 是一段短的、特异性的 DNA 序列,通常为 2-6 个碱基对,是 Cas 核酸酶结合并切割靶 DNA 序列所必需的。它位于入侵 DNA 中靶位点(原间隔序列)的下游。宿主自身的 DNA 中不存在 PAM。 CRISPR 该基因座是重要的自身与非自身识别机制,可防止自身免疫破坏。

(图片仅供参考)
原间隔序列邻近基序 (PAM) 是一段短的、特异性的 DNA 序列,通常为 2-6 个碱基对,是 Cas 核酸酶结合并切割靶 DNA 序列所必需的。它位于入侵 DNA 中靶位点(原间隔序列)的下游。宿主自身的 DNA 中不存在 PAM。 CRISPR 该基因座是重要的自身与非自身识别机制,可防止自身免疫破坏。
前间隔序列邻近基序(PAM)的发现是理解CRISPR-Cas系统如何如此精准运作的关键时刻。研究人员观察到,该系统要成功靶向并切割外源DNA,目标序列旁边必须存在一段特定的短序列(即前间隔序列)。对于广泛使用的来自化脓性链球菌的Cas9蛋白而言,该序列为5'-NGG-3',其中'N'可以是任何核苷酸。Cas9蛋白携带其向导RNA,首先扫描DNA以寻找该PAM序列。只有当Cas9蛋白与PAM序列结合后,才会尝试解开相邻的DNA,并检测其是否与向导RNA序列匹配。如果匹配成功,Cas9的核酸酶结构域将被激活,从而产生双链断裂。
这种依赖于PAM序列的靶向机制是该系统避免攻击细菌自身基因组的关键。CRISPR阵列(用于生成引导RNA)包含与靶序列相同的间隔序列。然而,CRISPR阵列内的重复序列并不包含PAM序列。因此,Cas9-gRNA复合物无法稳定地结合到CRISPR位点上,从而避免了自身免疫性疾病的发生。这种巧妙的自身/非自身区分机制是该系统高效性的标志。对于基因编辑应用而言,PAM序列的要求是一把双刃剑:它确保了特异性,但也限制了基因组中可能的靶位点范围。这促使人们开展了大量研究,致力于发现或改造具有不同、更灵活甚至无PAM序列要求的Cas变体,从而使基因组的任何部分都可进行编辑。
原型间隔区相邻基序 (PAM)
(如果日期未知或不相关,例如“流体力学”,则提供其显著出现的近似估计)
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