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कोशिका व्यवहार्यता मापने के लिए एमटीटी परख

1983
  • Tim Mosmann
कोशिका जीवविज्ञान प्रयोगशाला में कोशिका की जीवित रहने की क्षमता का आकलन करने के लिए एमटीटी परीक्षण करते हुए वैज्ञानिक।.

(यह छवि केवल उदाहरण के लिए बनाई गई है)

एमटीटी परख एक रंगमितीय विधि है। तरीका कोशिका चयापचय गतिविधि का आकलन करने के लिए, जो एक के रूप में कार्य करता है प्रॉक्सी कोशिका जीवन क्षमता, प्रसार और विषाणुता के लिए। सक्रिय माइटोकॉन्ड्रिया वाली जीवित कोशिकाओं में रिडक्टेस एंजाइम होते हैं जो पीले टेट्राज़ोलियम लवण एमटीटी (3-(4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-वाईएल)-2,5-डाइफेनिलटेट्राज़ोलियम ब्रोमाइड) को एक अघुलनशील बैंगनी फोर्माज़ान में परिवर्तित करते हैं। उत्पादित फोर्माज़ान की मात्रा जीवित कोशिकाओं की संख्या के समानुपाती होती है।

एमटीटी परख, जिसका वर्णन सबसे पहले टिम मोसमैन ने 1983 में किया था, ने शोधकर्ताओं द्वारा इन विट्रो में कोशिकीय प्रतिक्रियाओं को मापने के तरीके में क्रांतिकारी बदलाव लाया। इसने क्रोमियम-रिलीज़ परख जैसी पिछली विधियों की तुलना में एक तेज़, अधिक मात्रात्मक और कम रेडियोधर्मी विकल्प प्रदान किया। इसका सिद्धांत जीवित कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल डीहाइड्रोजिनेस की गतिविधि पर आधारित है। ये एंजाइम इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला का हिस्सा हैं और केवल चयापचय रूप से कार्यशील कोशिकाओं में ही सक्रिय होते हैं।

इस प्रक्रिया में, जल में घुलनशील पीले एमटीटी अभिकर्मक को कल्चर प्लेट में मौजूद कोशिकाओं में मिलाया जाता है। कोशिकाएं इसे अवशोषित कर लेती हैं और माइटोकॉन्ड्रियल एंजाइमों द्वारा इसे फोरमाज़ान में परिवर्तित कर देती हैं, जो एक अघुलनशील, बैंगनी रंग का क्रिस्टलीय उत्पाद होता है। फोरमाज़ान क्रिस्टल कोशिकाओं के भीतर जमा हो जाते हैं। कुछ समय बाद, डाइमिथाइल सल्फोक्साइड (डीएमएसओ) या अम्लीकृत अल्कोहल विलयन जैसे घुलनशील पदार्थ को मिलाकर इन क्रिस्टलों को घोल दिया जाता है, जिससे एक रंगीन विलयन प्राप्त होता है। फिर इस बैंगनी विलयन के अवशोषण को एक विशिष्ट तरंगदैर्ध्य (आमतौर पर 500 से 600 एनएम के बीच) पर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके मापा जाता है। रंग की तीव्रता चयापचय रूप से सक्रिय और इसलिए व्यवहार्य कोशिकाओं की संख्या के सीधे समानुपाती होती है। उपचारित कोशिकाओं के अवशोषण की तुलना अनुपचारित नियंत्रण कोशिकाओं से करके, परीक्षण यौगिक द्वारा उत्पन्न विषाक्तता या प्रसार अवरोध के प्रतिशत की गणना की जा सकती है।

UNESCO Nomenclature: 2406
कोशिका जीवविज्ञान

Type

चिकित्सा प्रक्रिया

व्यवधान

संतोषजनक

उपयोग

व्यापक उपयोग

शगुन

  • कोशिका संवर्धन तकनीकों का विकास
  • माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन और इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला की समझ
  • स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का आविष्कार
  • ऊतकविज्ञान में रेडॉक्स संकेतक के रूप में टेट्राज़ोलियम लवणों का उपयोग
  • एक मात्रात्मक, गैर-रेडियोधर्मी कोशिका व्यवहार्यता परीक्षण की आवश्यकता

आवेदन

  • कैंसर अनुसंधान में साइटोटॉक्सिक प्रभावों के लिए दवा स्क्रीनिंग
  • रसायनों का विष विज्ञान परीक्षण
  • वृद्धि कारकों के प्रति प्रतिक्रिया में कोशिका प्रसार का आकलन करना
  • दवा खोज में उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग
  • सामग्रियों का जैव अनुकूलता परीक्षण

पेटेंट:

NA

संभावित नवाचार विचार

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संबंधित विषय: एमटीटी परख, साइटोटॉक्सिसिटी परख, कोशिका व्यवहार्यता, कैलोरीमेट्रिक परख, फोरमाज़ान, माइटोकॉन्ड्रियल गतिविधि, विष विज्ञान, दवा स्क्रीनिंग, उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री।

ऐतिहासिक संदर्भ

Natural Killer cells in a laboratory setting, examining cytotoxicity mechanisms.

प्राकृतिक हत्यारा (एनके) कोशिका साइटोटॉक्सिसिटी

नेचुरल किलर (एनके) कोशिकाएं जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली की साइटोटॉक्सिक लिम्फोसाइट्स हैं, जो वायरल संक्रमण और कैंसर के खिलाफ प्रारंभिक रक्षा के लिए महत्वपूर्ण हैं। टी कोशिकाओं के विपरीत, इन्हें पूर्व संवेदीकरण की आवश्यकता नहीं होती है। एनके कोशिकाएं "मिसिंग-सेल्फ" पहचान तंत्र के माध्यम से उन लक्ष्य कोशिकाओं की पहचान करती हैं और उन्हें नष्ट करती हैं जिनमें एमएचसी क्लास I अणु कम हो गए हैं - जो ट्यूमर और वायरस द्वारा अपनाई जाने वाली एक सामान्य प्रतिरक्षा बचाव रणनीति है - और परफोरिन और ग्रैनजाइम के माध्यम से एपोप्टोसिस को प्रेरित करती हैं।

कोशिका व्यवहार्यता मापने के लिए एमटीटी परख

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(यदि तिथि अज्ञात है या प्रासंगिक नहीं है, उदाहरण के लिए "द्रव यांत्रिकी", तो इसके उल्लेखनीय उद्भव का एक अनुमानित आंकड़ा प्रदान किया गया है)

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